熒光分光光度法在克拉維酸聚合物及其他熒光雜質含量測定上的應用
天津港東科技股份有限公司? 應用分析部
摘要：阿莫西林克拉維酸鉀為阿莫西林與克拉維酸的復方制劑，前者是廣譜青霉素但不耐青霉素酶，后者為β-內酰胺酶抑制劑，具有廣譜抑酶作用，合用可提高阿莫西林抗產酶耐藥菌的作用，因此研究阿莫西林克拉維酸鉀片中克拉維酸聚合物及其他熒光雜質含量具有實際意義。本文以測定阿莫西林克拉維酸鉀片（2:1）中克拉維酸鉀及其他熒光雜質含量為例，依據《阿莫西林克拉維酸鉀片（2:1）一致性評價質量標準》，應用港東F-280型熒光分光光度計對拉維酸鉀及其他熒光雜質含量進行測定。結果證明此方法操作簡便，結果準確。
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關鍵詞：阿莫西林克拉維酸鉀片（2:1）；克拉維酸鉀及其他熒光雜質；分子熒光
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·?原理
樣品經溶解后調節pH至5.0，其中克拉維酸聚合物和其他熒光雜質已經形成了穩定的聚合物，過濾后，用分子熒光分光光度計檢測其在激發波長365nm、發射波長440nm處的熒光強度，以此計算克拉維酸聚合物及其他熒光雜質在阿莫西林克拉維酸鉀片中所占比例。
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·?實驗條件
1、儀器及附件：
?? 天津港東 F-280型熒光分光光度計????? ?1臺
?? 熒光石英比色皿??? ???????????????????2個
?? 超聲波清洗機? ???????????????????????1臺
2、分析條件：
激發波長：365nm
發射波長：440nm
3、藥品試劑：
??? 氫氧化鈉（分析純）、磷酸二氫鈉（分析純）、硫酸奎寧（分析純）、硫酸（分析純）、蒸餾水。
4、溶液配制：
（1）氫氧化鈉溶液（1mol/L）
精密稱取4.0000g氫氧化鈉粉末置于100ml小燒杯中，取少量的蒸餾水將其溶解，轉移至100ml容量瓶內，用蒸餾水定容。
（2）磷酸二氫鈉溶液（0.1mol/L）
精密稱取3.9000g磷酸二氫鈉粉末（NaH2PO4·2H2O分子量156）置于100ml小燒杯中，取少量的蒸餾水將其溶解，轉移至250ml容量瓶內，用蒸餾水定容。
（3）硫酸溶液（0.5mol/L）
用移液管量取13.5ml濃硫酸置于放有少量蒸餾水的100ml小燒杯中，待其放熱結束，轉移至500ml容量瓶內，用蒸餾水定容。
（4）硫酸奎寧對照品溶液（0.42μg/ml）
① 硫酸奎寧溶液（5000μg/ml）
精密稱取0.2500g硫酸奎寧粉末置于100ml小燒杯中，取少量的0.5mol/L硫酸溶液將其溶解，轉移至50ml容量瓶內，用0.5mol/L硫酸溶液定容。
② 硫酸奎寧溶液（50μg/ml）
用移液管量取1ml 5000μg/ml硫酸奎寧溶液，置于100ml容量瓶中，用0.5mol/L硫酸溶液定容。
③ 硫酸奎寧對照品溶液（0.42μg/ml）
用移液管量取0.84ml 50μg /ml硫酸奎寧溶液，置于100ml容量瓶中，用0.5mol/L硫酸溶液定容。
（5）供試品溶液（1mg/ml）
取本品若干顆，置于瑪瑙研缽中研磨成細粉，過100目篩子，混勻，取篩出的細粉適量，精密稱取0.1500g（本品中阿莫西林與克拉維酸鉀的質量比為2:1，所稱取細粉應約含克拉維酸鉀25mg），置于100ml小燒杯中，取少量的0.1mol/L磷酸二氫鈉溶液將其溶解，轉移至50ml容量瓶中，用0.1mol/L磷酸二氫鈉溶液定容，用漏斗進行過濾，取其濾液。
5、其它：
分析天平（0.0001g）、瑪瑙研缽、100目篩子、稱量紙若干、pH試紙（pH1～14）、50ml容量瓶、250ml容量瓶、500ml容量瓶、100ml容量瓶、1ml移液管、5ml移液管、10ml移液管、10ml具塞刻度試管、比色管架、漏斗、100ml小燒杯、玻璃棒若干、擦鏡紙等。
三、實驗方法
1、供試品樣品制備
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2、對照品樣品制備 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ??
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3、空白溶液制備
供試品空白溶液：0.1mol/L磷酸二氫鈉溶液（pH=5.0）。
對照品空白溶液：0.5mol/L硫酸溶液。
· 測定結果
應用港東F-280型熒光分光光度計的“波長掃描”模塊，分別讀取待測溶液的熒光強度，根據計算公式得到化妝品樣品中總硒的含量。
儀器設置參數：
激發波長 | 365nm | 發射起始波長 | 200nm | 激發狹縫 | 10.0nm |
PMT電壓 | 400V | 發射終止波長 | 760nm | 發射狹縫 | 10.0nm |
掃描速度 | 1200nm/min | 靈敏度 | 0.1s | 增益 | 1 |
以下為港東F-280型熒光分光光度計測定阿莫西林克拉維酸鉀片（2:1）中克拉維酸聚合物及雜質的發射譜圖和計算樣品中克拉維酸聚合物及雜質含量的計算公式。
?波長掃描測試譜圖：
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注：紅色譜圖為供試品參比溶液；黑色譜圖為對照品參比溶液；藍色譜圖為對照品溶液；綠色譜圖為供試品溶液。
?計算公式：
![熒光分光光度法在克拉維酸聚合物 及其他熒光雜質含量測定上的應用]( "熒光分光光度法在克拉維酸聚合物 及其他熒光雜質含量測定上的應用")
式中：Fx為供試品溶液熒光強度；
????? Fs為硫酸奎寧對照品溶液熒光強度；
????? Cx為供試品溶液中克拉維酸的濃度，mg/mL；
????? Cs為對照品溶液中硫酸奎寧的濃度，μg/mL；
????? 0.42為對照品溶液中硫酸奎寧的理論濃度，μg/mL。
本實驗標準樣品中克拉維酸聚合物及其他熒光雜質含量為5%，樣品1中克拉維酸聚合物及其他熒光雜質含量為0.606%，樣品2中克拉維酸聚合物及其他熒光雜質含量為0.567%，未超過標準樣品中的鋁鹽含量，故檢測合格。
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·?結論
根據《阿莫新林克拉維酸鉀片（2:1）一致性評價質量標準》所述方法，進行樣品測試，實驗結果表明，供試品溶液的熒光強度（Fx）小于對照品溶液的熒光強度（Fs）（5%w/w,以克拉維酸含量計算），故符合阿莫新林克拉維酸鉀片（2:1）一致性評價質量標準。
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